Caractérisation de 2 protéines membranaires d'Ehrlichia ruminantium, ERGA_CDS_01230 et 05140 et leur rôle dans l'adhésion à la cellule hôte
Résumé
Ehrlichia ruminantium est une bactérie intracellulaire obligatoire, transmise par les tiques du genre
Amblyomma et responsable de la cowdriose, une maladie des ruminants domestiques et sauvages.
Plusieurs vaccins expérimentaux ont déjà été testés mais la grande diversité génétique d’E. ruminantium
rend difficile l’obtention d’un vaccin efficace contre toutes les souches présentes sur le terrain. Afin de
développer à terme des stratégies de maîtrise de la cowdriose par des approches vaccinales et
thérapeutiques, il est important dans un premier temps de mieux comprendre l’interaction d’E.
ruminantium avec la cellule hôte et notamment les mécanismes d’adhésion associés. Dans ce contexte,
deux protéines membranaires d’E. ruminantium ERGA_CDS_01230, un probable transporteur de fer et
ERGA_CDS_05140, une porine, ont été étudiées pour leur rôle dans l’adhésion aux cellules hôtes. Les
deux protéines ont été produites avec succès dans le système Leishmania tarentolae avec un marqueur
GFP et une étiquette histidine et elles sont pourvues de modifications post-traductionnelles de type
glycosylation. Ce système est donc adapté pour produire des protéines recombinantes d’E. ruminantium,
qui nécessitent des modifications post-traductionnelles et plus largement pour d’autres bactéries. Nous
avons mis en évidence par cytométrie en flux que la protéine recombinante 05140 (recProt 05140)
adhère aux cellules endothéliales d’aorte bovine (BAEC) sans pouvoir le confirmer par microscopie à
balayage. Les tests d’adhésion par western blot sur différentes fractions cellulaires se sont révélés
négatifs. In vitro, le CDS ERGA_CDS_05140 est surexprimé au stade infectieux, corps élémentaires à
120h après infection par rapport au stade précédent à 96 h. Cependant, il n’a pas été possible de statuer
sur le rôle de la protéine native ERGA_CDS_05140 dans l’adhésion d’E. ruminantium aux cellules
hôtes. Nous avons ensuite montré que recProt 01230 est capable d’adhérer aux BAEC par CF et
microscopie à balayage. En effet, elle interagit avec des protéines du lysat cellulaire et avec celles de la
fraction « membranes et organelles ». RecProt 01230 n’adhère pas à l’héparane sulfate, une
glycosaminoglycane présente sur les cellules, excluant un mécanisme d’adhésion héparane sulfate
dépendant. Par contre, d’autres GAGs jouent probablement un rôle dans l’adhésion d’E. ruminantium à
la cellule hôte. En effet, des expériences préliminaires ont montré qu’un traitement enzymatique
dégradant deux GAGs, le dermatane sulfate et la chondroïtine sulfate, à la surface des BAEC, est associé
à une diminution de moitié du nombre de bactéries dans la cellule hôte après un cycle de développement.
De plus, in vitro, l’expression du CDS ERGA_CDS_01230 est plus importante au stade libre
infectieux, corps élémentaire qu’aux autres stades intracellulaires. Ces résultats montrent l’implication
probable d’ERGA_CDS_01230 dans l’adhésion d’E. ruminantium aux cellules hôtes. Enfin, les 2
protéines ERGA_CDS_01230 et 05140 induisent une réponse humorale chez les animaux vaccinés,
toutefois plus faible pour ERGA_CDS_05140. Si son rôle dans l’adhésion aux cellules, fortement
suggéré par nos travaux, se confirmait, ERGA_CDS_01230 serait un bon candidat vaccinal. Ces
premiers travaux constituent une première avancée dans la compréhension des mécanismes d’invasion
par E. ruminantium.
Origine : Fichiers produits par l'(les) auteur(s)
Loading...