Détection des Anticorps anti-HLA-G chez les patients transplantés -impact sur la survenue de rejet aigu et chronique.
Résumé
Après transplantation d’organe, le devenir sur le long terme du patient reste aujourd’hui non maîtrisé, malgré des traitements immunosuppresseurs efficaces. En effet, la transplantation est un acte lourd qui se complique de rejets aigus et de rejets chroniques du greffon menant à une perte totale de sa fonction. Les anticorps anti-HLA classique dirigés contre les greffons (DSA, Donor Specific Antibody), qui sont recherchés de manière systématique en routine médicale, sont un des facteurs immunologiques de survenue de ces complications. Récemment, des auteurs ont mis en évidence des anticorps dirigés contre les molécules HLA non classique, HLA-G, -E et –F dans des pathologies auto-immunes. Ces protéines semblent jouer un rôle essentiel dans l’acceptation immunologique du greffon et certaines de leurs isoformes telles que HLA-G*01:04, et -G*01:06 et -E*01:03 sont associées à une évolution péjorative du greffon chez des transplantés pulmonaires. Aussi, il est possible que ces isoformes soient la cible d’anticorps dans les transplantations d’organes, induisant des rejets.
Aussi, l’objectif de mon travail a été de mettre au point une technique de détection d’anticorps anti-HLA-G dans le sérum et/ou plasma de sujets sains et de patients transplantés compliqués ou non, de rejets aigus et/ou chroniques.
Mon travail a principalement porté sur la mise au point d’une adaptation de la technique d’immunocapture enzymatique MAIPA (MAIGA) de la société ApDIA® afin de détecter les anticorps anti-HLA-G. Aussi, il a consisté tout d’abord à construire des lignées transduites exprimant différentes isoformes HLA-G (HLA-G*01:01, HLA-G*01:04, HLA-G*01:06) et HLA-E (HLA-E*01:01 et HLA-E*01:03), à partir de cellules SPI-801. Dans un second temps, l’identification d’un sérum positif et d’un anticorps monoclonal (MEM-G9) se liant aux différentes isoformes HLA-G avec la B2-microglobuline ont permis de maitriser les différentes étapes de la technique MAIGA et de déterminer un seuil de positivité. Enfin, 250 sérums ont été explorés sur cette technique en comparant leur réactivité sur les lignées transduites HLA-G avec la lignée sauvage et la lignée transduite HLA-E*01:03.
Parmi les 90 sujets sains, un seul sérum possédait une réactivité spécifique contre les lignées transduites HLA-G. Elle était négative pour tous les autres sérums testés, que ce soit chez 16 femmes venant d’accoucher et chez 35 transplantés pulmonaires avant et après transplantation. Chez 12 transplantés pulmonaires et deux sujets sains, une réactivité non spécifique était mise en évidence avec les lignées transduites et sauvage, suggérant une reconnaissance d’un autoantigène exprimée par la lignée cellulaire SPI-801.
En conclusion, ce travail a permis de mettre au point un outil de détection spécifique des anticorps anti-HLA-G non-dénaturée. Ces derniers semblent peu fréquents, que ce soit chez les sujets sains ou chez les sujets transplantés compliqués. Afin de confirmer ce résultat qui contraste avec celui de certaines publications, des modifications du système de détection doivent être portées au minimum sur le clone d’immunocapture et le tampon de lyse. Finalement, cette étude préliminaire doit être élargie à la recherche de tous les anticorps anti-HLA non classique et aux cohortes de patients atteints de maladie auto-immune ainsi que des transplantés rénaux et cardiaques.
Origine : Fichiers produits par l'(les) auteur(s)
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