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, Précautions : Particules MGP : La suspension de particules magnétiques (bouchon brun) doit être vortexée. Mélanger immédiatement avant usage afin d'avoir une suspension homogène

K. Protéinase, Reconstituer chaque flacon (bouchon rose) en ajoutant 1,2 ml de tampon d'élution (bouchon jaune)-bien mélanger. 1 flacon est nécessaire pour 32 extractions

, Ne pas utiliser un tampon qui contient un précipité

, Allumer 2 bains secs : l'un à 65°C et l'autre à 95°C (15 à 30 min avant utilisation)-Allumer l'appareil MagNA Pure (chauffage des blocs) et le système informatique-Mettre 1 ml d'une culture bactérienne dans un tube eppendorf de 1,7 ml.-Centrifuger les cultures à 15000 g pendant 3 min à température ambiante. Eliminer le surnageant et conserver le culot, Préparation des échantillons : (pour l'extraction simultanée de 32 échantillons maximum

, Mettre des cavaliers pour éviter que les tubes ne s'ouvrent.-Incuber ensuite les échantillons à 95°C pendant 10 min.-Centrifuger brièvement les tubes (centrifugeuse de paillasse) afin de collecter la totalité de l'échantillon au fond du tube, Pipeter la totalité des échantillons (400 µl) et les mettre dans des tubes de 2 ml contenant 250 µl de billes de verre

, Homogénéiser les échantillons à l'aide du MagNA Lyser (vitesse : 6000 ; temps : 30 sec).-Prélever 200 µl de chaque échantillon et procéder au transfert dans la cartouche MagNA Pure LC Sample cartridge

, La purification de l'ADN est réalisée par l'automate. Consulter son Mode opératoire

, ? Ne pas oublier que seulement la moitié de l'échantillon est purifiée

, Cliquer sur Change dropcatcher pour déplacer le bras vers l'avant. Placer le récupérateur de gouttes avec des pinces, puis cliquer sur Home pour repositionner le bras de l'automate.Lancer le logiciel qui gère l'appareillage. Sélectionner le protocole DNA III Bacteria. Suivre les instructions du logiciel et renseigner le nombre d'échantillons à traiter (entrer la nature et le nom des échantillons), Positionner les consommables plastiques dans l'appareil (se référer à l'écran d'information pour leur place et leur nombre).Sortir le rack des bacs à réactifs et le remplir avec 6 bacs

, Remplir tous les bacs avec la quantité de réactif demandée (le volume à pipetter dans chaque récipient est indiqué sur l'écran d'information)

, Sur l'écran, confirmer le positionnement correct des consommables et réactifs en cliquant sur le schéma des récipients respectifs. Cliquer sur « OK » pour démarrer l'automate. Vous ne pourrez démarrer l'appareil que si la station de travail est fermée, ? Remplir le bac contenant les billes magnétiques MGPs au dernier moment : après avoir chargé les échantillons et juste avant de lancer l'extraction !!!-Transférer les bacs à réactifs et la cartouche contenant les échantillons dans le robot

, Fermer la cartouche contenant les ADN purifiés avec un adhésif (Cartridge seal) ou (et cela est préférable) transférer chaque échantillon d'ADN purifié dans un tube eppendorf à faible rétention identifié, pp.125-128

. Retirer-le-récupérateur-de-gouttes, Cliquer sur Change dropcatcher pour déplacer le bras vers l'avant. Faire glisser le plastique avec des pinces, puis cliquer sur Home pour repositionner le bras de l'automate.-Lancer la décontamination de l'appareil

, Les échantillons sont lysés par incubation dans un tampon contenant des sels chaotropiques et de la protéinase K. Des particules en verre magnétisées sont ajoutées et l'ADN se fixe à leur surface. Les substances non fixées sont enlevées par l'intermédiaire de plusieurs lavages, Principe du test : La procédure d'isolement est basée sur une technologie de billes magnétiques

, L'échantillon est placé dans les puits de la cartouche

, Le tampon de lyse et de fixation est ajouté à l'échantillon, favorisant la lyse cellulaire complète et le re-largage des acides nucléiques. Les nucléases sont dénaturées

, ADN se fixe à la surface de silice des billes grâce aux conditions chaotropiques, à l'isopropanol et à la haute stringence ionique du tampon de Tp de lyse

, Les billes sur lesquelles l'ADN s'est fixé sont magnétiquement séparées du reste de l'échantillon lysé

, Les billes sont lavées plusieurs fois avec du tampon de lavage (bouteilles 1,2 et 3; noire, bleu et rouge) pour éliminer les protéines (nucléases), membranes, inhibiteurs de la PCR

, Les billes sont magnétiquement séparées du tampon de lavage contenant les débris résiduels

L. Élué, jaune) des billes magnétiques à 70°C et transféré dans la cartouche d'élution tandis que les billes sont retenues dans le cône de réaction

, Add 600?l Nuclei Lysis Solution. Pipet gently to mix. Incubate for 10 minutes at 80°C, then cool to room temperature. Add 3?l of RNase Solution. Mix, incubate at 37°C for 60 minutes, then cool to room temperature, Mode opératoire modifié pour l'extraction à partir du kit Wizard Genomic DNA Purification Kit (ref CAT A1120) de