ETUDE DE L'ASSEMBLAGE DU COMPLEXE EJC (EXON JUNCTION COMPLEX)

Résumé : Chez les eucaryotes, la maturation et les fonctions des ARN messagers (EJC) sont dictées par de nombreuses protéines se liant à l’ARN. Le complexe EJC (Exon Junction Complex), est un complexe multiprotéique déposé sur des ARNm, produits de l’épissage. Ce complexe est organisé autour d’un cœur tétramérique, constitué des facteurs eIF4A3 qui assurent la liaison à l’ARN et des protéines MLN51, Magoh et Y14. Le cœur de l’EJC constitue une plate-forme pour de nombreux facteurs périphériques qui influencent l’épissage des ARN pré-messagers, participent à la localisation, la traduction et la stabilité des ARNm. Si l’EJC joue un rôle central dans la vie des ARNm son mode d’assemblage reste mal compris. Notre laboratoire a identifié le facteur d’épissage CWC22 et montré qu’il est essentiel pour escorter eIF4A3 dans le spliceosome et pourrait être impliqué dans la régulation de l’assemblage de l’EJC. Récemment, nous avons identifié la protéine CWC27 comme partenaire potentiel de CWC22 et eIF4A3. L’objectif de mon projet fut de caractériser par des approches in vitro et in vivo le complexe formé par ces trois protéines : CWC27, CWC22 et eIF4A3. La mise au point de conditions d’immunoprécipitation de la protéine CWC27 à partir de cellules humaines en culture puis l’analyse des éluâts par spectrométrie de masse et par western blot m’ont permis de montrer que les protéines CWC27 et CWC22 forment un dimère dans la cellule. Dans un second temps, l’expression de ces protéines recombinantes m’a permis de démontrer que l’interaction entre ces deux partenaires était directe. Le dimère offrirait alors un site de liaison stable pour la fixation de la protéine eIF4A3. L’ensemble de ces résultats suggère que le complexe formé par les protéines CWC27 et CWC22 pourrait constituer un pré-complexe-EJC (pré-EJC) impliqué dans le recrutement de la protéine eIF4A3 par la machinerie d’épissage pour l’assemblage des EJC. L’impact de ces travaux est d’autant plus important qu’ils s’inscrivent dans un contexte plus global, la compréhension de maladies génétiques orphelines associées aux mutations des protéines CWC27 et eIF4A3.
Type de document :
Mémoire de diplôme
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Contributeur : Isabelle Barbosa <>
Soumis le : jeudi 24 janvier 2019 - 15:00:46
Dernière modification le : vendredi 25 janvier 2019 - 01:13:06

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Isabelle Barbosa. ETUDE DE L'ASSEMBLAGE DU COMPLEXE EJC (EXON JUNCTION COMPLEX). Sciences du Vivant [q-bio]. 2018. ⟨hal-01992567⟩

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