Recherche d'optimisations dans la production de cellules souches embryonnaires murines.

Résumé : Une cellule souche embryonnaire (ES cells) est définie par deux caractéristiques : la pluripotence, qui représente le potentiel d’une cellule à se différencier dans tous les types cellulaires de l'organisme, et l'auto renouvellement, qui lui permet de se diviser indéfiniment sans différenciation. La modification génique de cellules souches embryonnaires de souris par recombinaison homologue permet la création de modèles murins complexes. En culture in vitro il est important de pouvoir maitriser leur qualité car le maintien de la pluripotence des cellules ES est primordial pour l’obtention de la lignée murine porteuse de la mutation. Mon objectif a été de mettre en place une procédure de contrôle de l’état de pluripotence cellulaire. Une telle procédure est indispensable pour surveiller nos cultures et détecter l’apparition de dysfonctionnement mais aussi pour évaluer nos procédures et les optimiser. J’ai recherché un lien entre nos observations de culture cellulaire (morphologie et taux de croissance), la quantification de certains marqueurs moléculaires de la pluripotence (dosage enzymatique des phosphatases alcalines et quantification des facteurs de transcription Nanog, Oct4 et Sox2 par cytométrie en flux) et l’analyse fonctionnelle de nos cellules ES (génération d’individu chimérique). Ces analyses m’ont permis d’identifier et de mettre en place certaines améliorations dans nos procédures de culture qui ont augmenté le niveau de pluripotence de nos cellules ES.
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Mémoire de diplôme
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Contributeur : Bruno Estebe <>
Soumis le : lundi 29 janvier 2018 - 16:24:05
Dernière modification le : vendredi 2 février 2018 - 01:21:45
Document(s) archivé(s) le : lundi 30 avril 2018 - 12:21:06

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Bruno Estebe. Recherche d'optimisations dans la production de cellules souches embryonnaires murines. . Biologie cellulaire. 2017. ⟨hal-01646344⟩

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