OBTENTION ET CARACTERISATION D’UNE POPULATION DE PRECURSEURS CARDIAQUES, HOMOGENES ET AMPLIFIABLES, POUR SON UTILISATION EN THERAPIE CELLULAIRE DE L’INSUFFISANCE CARDIAQUE LIEE A LA MYOPATHIE DE DUCHENNE

Résumé : La dystrophie musculaire de Duchenne est caractérisée par une faiblesse musculaire progressive et la mort prématurée résultant d’une carence en dystrophine, protéine exprimée dans tous les muscles du corps humain. Il n’existe pas, à l’heure actuelle, de traitement curatif et le déficit en dystrophine, qui atteint entre autres les cardiomyocytes, peut ainsi conduire à l’apparition d’insuffisance cardiaque et à une mortalité précoce. Les cellules souches embryonnaires (ES) considérées depuis longtemps comme une source possible de cellules cardiaques pourraient permettre de traiter cette pathologie. En effet, en culture, les ES sont capables de se différencier en cardiomyocytes. Ces cellules présentent des caractéristiques phénotypiques similaires à celles des cardiomyocytes adultes. Il semble donc envisageable de transplanter des cellules ES induites in vitro vers la différenciation en cardiomyocytes et rigoureusement sélectionnées, chez des patients souffrant de Myopathie de Duchenne. Dans l’optique d’obtenir une population de précurseurs cardiaques à partir de cellules embryonnaires de souris (mES), nous nous sommes intéressés à deux d’approches, (i) l’une basée sur l’obtention d’une population homogène qui n’exprime pas le marqueur Flk1 (Flk1-), pouvant mener à l’apparition de cardiomyocytes, (ii) la seconde consistant en l’ajout de facteurs (Wnt3a et/ou dkk-1) régulant la voie Wnt, activatrice de la différenciation mésodermique. Les premières expériences ont montré que dans une lignée de mES, la lignée D3, dont on induit la différenciation en cellules cardiaques, l’expression des différents marqueurs de l’endoderme et du mésoderme apparaissent dès trois jours. D’autre part, le tri de la population Flk1- ainsi que l’ajout de Wnt3a à ces mêmes cellules, mène dès quinze jours de différenciation à la formation de cardiomyocytes battants. La deuxième partie de l’étude a porté sur l’utilisation précurseurs cardiaques, obtenus à partir de cellules souches embryonnaires humaines (hES), pour la thérapie cellulaire dans un modèle canin de la myopathie de Duchenne. Le chien Golden Retriever dystrophique (chien GRMD) fournit un modèle animal puissant de la myopathie de Duchenne, imitant le phénotype cardiaque humain. Ces animaux développent, très tôt dans la pathologie (à partir de 6 mois), les dysfonctionnements du ventricule associé à une fibrose légère qui dégénère ensuite vers la fibrose calcifiée. Notre objectif était de tester si un tel environnement cardiaque était convenable pour la greffe de cellules progénitrices cardiaques issues de hES. À cette fin, nous avons greffé chez des chiens GRMD des progéniteurs cardiaques dérivés de cellules hES, en utilisant directement l'implantation épicardique sous immunosuppression. Nous n’avons pas constaté d’amélioration fonctionnelle de ces animaux après greffe et avons retrouvé très peu de cellules humaines. Cela suggère une mort cellulaire des cellules lors de l’injection, ou très tôt après, qui pourrait être due à l'environnement fibreux et calcifié du tissu hôte.
Type de document :
Mémoire de diplôme
Biologie cellulaire. 2011
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Alexandra Plancheron. OBTENTION ET CARACTERISATION D’UNE POPULATION DE PRECURSEURS CARDIAQUES, HOMOGENES ET AMPLIFIABLES, POUR SON UTILISATION EN THERAPIE CELLULAIRE DE L’INSUFFISANCE CARDIAQUE LIEE A LA MYOPATHIE DE DUCHENNE. Biologie cellulaire. 2011. 〈hal-01478928〉

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