Mise en place de l’étude du rôle de CTCF et YY1 sur l’expression du gène Xist impliqué dans l’inactivation du chromosome X, chez la souris
Résumé
L’inactivation du chromosome X (ICX) est un processus permettant de compenser, chez les mammifères, le déséquilibre de dose pour les gènes du chromosome X entre le mâle (XY) et la femelle (XX). Ce processus consiste en l’inactivation transcriptionnelle d’un des deux chromosomes X, chez la femelle. Cette inactivation est sous le contrôle d’une région du chromosome X : le centre d’inactivation du chromosome X (Xic). Au sein de cette région se trouve un gène indispensable à l’inactivation du chromosome X : Xist (X inactive specific transcript). Ce gène, qui ne s’exprime que chez les femelles et uniquement à partir d’un des deux chromosomes X, produit un ARN non-codant qui recouvre le chromosome à partir duquel il est transcrit et induit son extinction transcriptionnelle. Comprendre la régulation de Xist est donc essentiel pour comprendre la mise en place et la régulation de l’inactivation. Nous savons déjà que Tsix, un transcrit antisens à Xist est impliqué, et que des facteurs associés à la pluripotence jouent également un rôle important dans la répression de Xist.
Des données obtenues au laboratoire ainsi que dans d’autres équipes indiquent également que les protéines CTCF et YY1 seraient impliquées dans la régulation de Xist. Plusieurs sites de fixation de chacune de ces protéines ont été identifiés in silico et expérimentalement au niveau de la région promotrice de Xist.
Ce mémoire se concentre sur la mise en place de l’étude du rôle de CTCF et YY1 au niveau des différents sites présents au promoteur de Xist sur l’expression de celui-ci et plus généralement sur l’inactivation du chromosome X. Pour ce faire, nous avons choisi une approche de délétion/complémentation. Comme modèle d’étude, nous utilisons les cellules souches embryonnaires de souris femelles ayant deux chromosomes X actifs.
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