CARACTERISATION DE LA 12-S-LIPOXYGENASE DANS L'ENDOMETRE OVIN PENDANT LA GESTATION PRECOCE MISE EN EVIDENCE DE L'EXISTENCE DE DEUX TRANSCRITS

Abstract : Une meilleure compréhension de la reproduction des animaux domestiques dépend d'une bonne connaissance du trafic moléculaire existant entre les tissus maternels utérins et le conceptus. Des molécules complexes sont impliquées dans les interactions embryo-maternelles, parmi lesquelles des protéines et des médiateurs lipidiques jouent un rôle important pour l'implantation et le développement de l'embryon. Chez certaines espèces, des médiateurs lipidiques dérivés des lysophospholipides et des éicosanoïdes ont été décrits comme acteurs impliqués dans ces processus biologiques. Chez les ruminants, l'endomètre synthétise de nombreux métabolites cyclooxygénés dérivés de l'acide arachidonique (AA), un acide gras polyinsaturé, issus des phospholipides membranaires de la cellule. L'AA peut également suivre d'autres voies métaboliques telles celle des Epoxygénases P450 ou encore celle des Lipoxygénases (LOX). Les travaux préliminaires au sein de notre laboratoire ont montré que l'endomètre ovin produit de grandes quantités de 12-S-HETE, suggérant l'implication de la 12-S-Lipoxygénase. Le rôle de cet enzyme dans le tractus reproducteur femelle est encore incompris alors qu'il a été clairement décrit dans des processus de prolifération cellulaire et des pathologies telles le cancer. L'objectif de ce travail a été de déterminer la capacité de l'utérus de brebis à produire des métabolites lipoxygénés, examiner l'expression de cet enzyme au niveau des transcrits et analyser la régulation génique de la 12-S-Lipoxygénase pendant le cycle oestral et en début de gestation. Nous avons pu mettre en évidence, pour la première fois, la capacité de l'endomètre à produire une grande quantité de transcrits spécifiques de la 12-S-Lipoxygénase de type plaquettaire. Nous avons caractérisé un ARNm correspondant au gène ALOX12 ainsi qu'une forme issue d'épissage alternatif, au dernier exon manquant. Ce variant n'est exprimé qu'au cours de l'élongation et pendant l'implantation du conceptus alors que le transcrit correspondant à la forme "normale" est présent pendant toute la durée du cycle oestral et sur toute la période péri-implantatoire. Le clonage en vecteurs d'expression eucaryote pCMVß et la transfection en lignée de cellules COS-7 a permis la production des protéines correspondantes in vitro. L'activité biologique de ces deux protéines a été évaluée par un test de conversion de l'AA en 12-S-HETE, mesuré par HPLC. L'activité biologique de la protéine correspondant à la forme épissée du transcrit reste inexistante par comparaison à la forme "normale". En revanche, le test d'activité réalisé en présence des deux protéines recombinantes, par compétition vis-à-vis du substrat, révèle une diminution de l'activité de la 12-S-Lipoxygénase de forme "normale", suggérant un possible rôle régulateur de la forme courte sur la forme "normale". La cinétique d'expression de la protéine 12-S-Lipoxygénase dans l'endomètre a été évaluée sur les mêmes périodes d'étude grâce à l'utilisation d'un anti-peptide, spécifique de chaque forme, fabriqué au laboratoire. L'anti-peptide correspondant à la forme courte n'a pas permis la détection de celle-ci au sein de l'utérus. Cette forme existe-t-elle réellement in vivo? Des investigations supplémentaires restent à poursuivre pour sa mise en évidence et le rôle de la 12-S-Lipoxygénase quant au développement et l'implantation de l'embryon chez la brebis.
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Contributeur : Olivier Dubois <>
Soumis le : lundi 9 janvier 2017 - 17:42:35
Dernière modification le : mardi 21 mars 2017 - 14:12:17
Document(s) archivé(s) le : lundi 10 avril 2017 - 16:39:04

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Citation

Olivier Dubois. CARACTERISATION DE LA 12-S-LIPOXYGENASE DANS L'ENDOMETRE OVIN PENDANT LA GESTATION PRECOCE MISE EN EVIDENCE DE L'EXISTENCE DE DEUX TRANSCRITS . Sciences du Vivant [q-bio]. 2016. 〈hal-01430367〉

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